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長(zhǎng)鏈脂肪酸是指碳鏈上的碳原子數(shù)超過12的脂肪酸,通常是指12到24個(gè)碳原子。長(zhǎng)鏈脂肪酸根據(jù)碳鏈?zhǔn)欠窈须p鍵,以及雙鍵數(shù)量的多少,分為飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸。比如EPA,DHA,油酸,棕櫚酸,亞油酸,花生四烯酸,α-亞麻酸等。長(zhǎng)鏈脂肪酸是重要的能量來源,構(gòu)成細(xì)胞膜,維持它們的流動(dòng)性和穩(wěn)定性,合成激素和信號(hào)分子,如果過量攝入飽和脂肪酸,會(huì)提高膽固醇水平,增加心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
檢測(cè)方法:氣相色譜(GC)法或氣相質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法。
1.樣品處理
稱取一定量的樣品,加入正己烷,CH3OH-KOH混合振蕩,并進(jìn)行甲酯化30min,取出4000r/min離心10min,0.22um膜過濾。
2.色譜條件
DB-23 檢測(cè)脂肪酸的專用色譜柱,長(zhǎng)度30m,內(nèi)徑0.25mm,膜厚0.25μm。以N2為載氣,N2和H2的流量為30ml/min,空氣流量為300ml/min,分流比50:1。進(jìn)樣口溫度250℃,氫火焰離子檢測(cè)器,280-300℃。色譜柱程序升溫,初始溫度 50℃保持 1min,然后以 25℃/min 升到175℃,保持 0min,以 4℃/min 升到230℃,保持 10min流量:1.3ml/min,進(jìn)樣量: 1μL。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
將要測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解配制成標(biāo)準(zhǔn)母液,梯度稀釋成6個(gè)濃度點(diǎn),比如5倍的梯度。進(jìn)樣到氣相色譜,通過色譜峰面積和對(duì)應(yīng)的濃度,擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)1>R2>0.999。
4.樣品測(cè)定
進(jìn)樣到氣相色譜,通過標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間,可以識(shí)別出目標(biāo)色譜峰。對(duì)峰面積進(jìn)行積分,并代入到回歸方程,可計(jì)算出樣品溶液中的對(duì)應(yīng)的長(zhǎng)鏈脂肪酸含量。