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二磷酸尿苷葡萄糖,是一種糖核苷酸,可以縮寫為UDPG。它在人體內(nèi),是由尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶催化而成的。這種化合物廣泛的分布在植物、動物和微生物中,為蔗糖,淀粉等多糖提供葡萄糖基。在單糖的互變,生成糠醛酸的時候,可以作為重要的中間產(chǎn)物。
實驗室的檢測方法,包括有高效液相色譜(HPLC)和酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)。
1.HPLC
要想分離出樣品中的化合物UDPG,就要先通過物理和化學的方法,將樣品粉碎,過篩,溶入有機溶劑,超聲,離心,過濾等。盡可能的提取出來,以供檢測。這個時候,就要考驗基本功底了。同時,能不能測出來,也是看預處理的提取過程是否合理。比如,在5℃的條件下,高速離心10min,取上清液用0.45um膜過濾。
色譜條件:通過合適的色譜柱和流動相,將樣品中的UDPG分離并洗脫出來,通過DAD檢測器可檢測低濃度目標物。具體參數(shù),需要根據(jù)實際情況進行開發(fā)或驗證,以獲得較有效的色譜峰,便于后續(xù)的標準曲線和定量計算。
2.ELISA
基于雙抗體夾心法:將純化的UDPG捕獲抗體包被于微孔板,加入待測樣本后形成抗原-抗體復合物,再與HRP標記的檢測抗體結(jié)合。通過底物TMB顯色,顏色深淺與UDPG濃度成正比。
按說明書的操作步驟進行,顯色反應完成后,用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣本中UDPG的具體含量。