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維生素a主要來(lái)源于深綠色蔬菜，水果和動(dòng)物性食物等。它是一種脂溶性的維生素，化學(xué)式為C20H30O，分子量286.45，紫外線能氧化它。其實(shí)，維生素a并非一種，它還包含了維生素a1，維生素a2。維生素a維持了人體正常的生理代謝和技能，比如維持視力，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，增強(qiáng)免疫力等。維生素a不是單一的化合物，而是一系列包括視黃醇，視黃醛，視黃酸等。從結(jié)構(gòu)上來(lái)看，它是由20個(gè)碳組成的，具有1個(gè)β-紫蘿酮環(huán)，1個(gè)類(lèi)異戊二烯的側(cè)鏈。在C15的位置上，結(jié)合了羥基，或醛基，或羧酸基等。

測(cè)定樣品中的維生素a含量，方法有比較多。實(shí)驗(yàn)室里面，主要用的是高效液相色譜（HPLC）法、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、比色法等。

以HPLC為例

它是利用色譜柱的吸附分配功能，在流動(dòng)相的沖洗作用下，不斷地分離出來(lái)，在檢測(cè)器中形成一個(gè)個(gè)的峰值。因此，這里就用到維生素a的物理和化學(xué)性質(zhì)，同時(shí)要對(duì)儀器的性能有足夠的了解，才能知道用什么樣的色譜柱，柱溫設(shè)置多少，流動(dòng)相的配制比例等更準(zhǔn)確，有效的分離出來(lái)。其實(shí)，這個(gè)過(guò)程中，還有很多注意的問(wèn)題。比如，樣品的處理過(guò)程。每個(gè)方法都有前后順序的，常用到粉碎，超聲，萃取，過(guò)濾等。之前我們說(shuō)過(guò)，維生素a是脂溶性的，就要溶解在有機(jī)溶劑中。同時(shí)，它對(duì)紫外光是比較敏感的。

色譜條件：比如C18的色譜柱，250mm長(zhǎng)，4.6mm內(nèi)徑，5um粒徑。以正己烷-異丙醇（997:3）為流動(dòng)相，流速1ml/min。紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)325nm，進(jìn)樣量10uL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：使用外標(biāo)法測(cè)，將標(biāo)準(zhǔn)品用流動(dòng)相或有機(jī)溶劑溶解，并進(jìn)行梯度的稀釋5-7個(gè)濃度點(diǎn)。最低的點(diǎn)，確保在檢測(cè)器有效范圍內(nèi)，比如5-10倍的信噪比。根據(jù)設(shè)定好的色譜條件，測(cè)定各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，出來(lái)了色譜峰。對(duì)面積進(jìn)行積分，對(duì)應(yīng)各自的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，在表格上可以用函數(shù)來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程?；貧w方程的相關(guān)系數(shù)r2＞0.999，需要考慮回收率，穩(wěn)定性等參數(shù)。

樣品測(cè)定：使用hplc測(cè)樣品的色譜峰，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時(shí)間，確定樣品的位置，并對(duì)峰面積進(jìn)行積分。根據(jù)回歸方程，可以計(jì)算出維生素a的含量。