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隱黃質(zhì)接近于β胡蘿卜素，比β-胡蘿卜素多一個(gè)羥基，2個(gè)含有4個(gè)甲基的20碳分子對(duì)尾連接而成，屬聚異戊二烯復(fù)合物。它是類胡蘿卜素中葉黃素的一種，屬于天然的植物色素，來源于水果，蔬菜，蛋黃等。化學(xué)式為C40H56O，分子量為552.89。具有中和自由基，降低氧化應(yīng)激損傷的作用。在人體內(nèi)，隱黃質(zhì)可以轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素A，參與調(diào)節(jié)免疫功能和視力。

目前來說，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)樣品中的隱黃質(zhì)的含量，主要有高效液相色譜（HPLC）法。

1.樣品處理

樣本要求：固體樣本量≥0.2g，液體≥0.2mL。將樣品中的隱黃質(zhì)提取處理，是需要一套完整的，有效的方法，遵循標(biāo)準(zhǔn)操作流程完成。比如，用0.1%的二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）的乙醇溶液和60%氫氧化鉀水溶液，在50℃的水浴中振蕩皂化。之后，用正己烷-乙醚-環(huán)己烷混合溶劑萃取。經(jīng)過氮吹或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，用甲醇或乙腈復(fù)溶，并用0.45um濾膜過濾，待測(cè)。

2.色譜條件

采用常規(guī)的C18色譜柱，250mm長(zhǎng)，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5um，柱溫30℃；以乙腈-水等度洗脫，或乙腈-甲醇梯度洗脫，流速1ml/min；紫外檢測(cè)器，根據(jù)實(shí)際情況確定波長(zhǎng)，比如450nm；進(jìn)樣量10-20ul，根據(jù)出峰情況調(diào)整。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

使用隱黃質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品，用流動(dòng)相溶解，梯度稀釋5-7個(gè)濃度點(diǎn)。濃度是逐漸變低的，要考慮到稀釋的最后一個(gè)點(diǎn)，在檢測(cè)器的有效范圍內(nèi)，一般是信噪比的5-10倍的地方。通過有效的色譜條件，依次上機(jī)測(cè)定各個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)出峰情況進(jìn)行判斷，并確定對(duì)應(yīng)的色譜峰，積分處理?？梢栽谵k公軟件中，使用函數(shù)公式來做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，相關(guān)系數(shù)r2＞0.999。需要方法學(xué)驗(yàn)證的時(shí)候，要確定隱黃質(zhì)的良好的線性范圍，檢出限，定量限，加標(biāo)回收率，重復(fù)性RSD等。

4.樣品測(cè)定和計(jì)算

將處理好的樣品，上機(jī)測(cè)定對(duì)應(yīng)出對(duì)應(yīng)的色譜峰。對(duì)色譜峰面積進(jìn)行積分，根據(jù)回歸方程，計(jì)算出樣品中的隱黃質(zhì)含量。