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銀杏內(nèi)酯是從銀杏樹的葉片中提取出來的,是由倍半萜內(nèi)酯和二萜內(nèi)酯組成的萜類化合物。它的具體成分還包括了白果內(nèi)酯,銀杏內(nèi)酯a,銀杏內(nèi)酯b,銀杏內(nèi)酯c等。白果內(nèi)酯屬于倍半萜內(nèi)酯。這些化合物有獨特的分子結構,擁有12碳骨架,包含一個叔丁基和六個五元環(huán)。它具有多種生物活性,具有抗氧化,抗炎,促進血液循環(huán)等作用。
檢測樣品中銀杏內(nèi)酯含量的方法,包括高效液相色譜(HPLC)法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)法等。
銀杏內(nèi)酯的提取方法有:溶劑萃取法、柱提取法、溶劑萃取-柱提取法。其中,溶劑法比較常用,也相對簡單。比如,將樣品磨成粉,過篩,精密稱量,用甲醇溶解,蒸干后水溶,后面用醋酸乙酯提取,過濾,待測。提取很重要,但色譜條件是檢測的關鍵。
色譜條件:使用常規(guī)的C18色譜柱,長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um,柱溫30-35℃;以甲醇-四氫呋喃-水或正丙醇-四氫呋喃-水為流動相,流速為1ml/min;紫外檢測器或蒸發(fā)光散射檢測器,進樣量5-10uL。
標準曲線:對照品(銀杏內(nèi)酯A、B、C和白果內(nèi)酯),精密稱量適當?shù)膶φ掌?,分別放在容量瓶中,用甲醇溶解。根據(jù)信噪比的5-10倍,確定最低的濃度點。成倍的,梯度稀釋5-7個濃度點并記錄。上hplc測定對應的色譜峰,手動或自動積分,結合對應的對照品濃度,在辦公軟件中根據(jù)函數(shù)描點劃線形成標準曲線,得到回歸方程,相關系數(shù)r2大于0.999。也可以做方法學驗證。
樣品含量計算:使用有效的色譜條件,對樣品進行測定,出來色譜峰的面積,進行積分處理。將峰面積代入到回歸方程,是可以計算出樣品中對應的銀杏內(nèi)酯含量。
質(zhì)譜法,是在液相的基礎上,將化合物打碎成離子碎片,根據(jù)質(zhì)荷比(m/z)形成一個一個的質(zhì)譜峰。使用標準曲線,計算含量。