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甲硫氨酸,又稱蛋氨酸,化學(xué)式為C5H11O2NS,分子量為149.21,有D和L兩種構(gòu)型。它是人體必需的氨基酸之一,要從外部獲取,并參與蛋白質(zhì)合成、甲基化反應(yīng)、抗氧化作用和脂肪代謝等過程。溶于水、稀酸和稀堿,極微溶于95%的乙醇,不溶于乙醚。甲硫氨酸在生物體內(nèi)通過甲硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶,轉(zhuǎn)化為甲基供體S-腺苷甲硫氨酸,參與約50種不同甲基受體的甲基化過程。甲硫氨酸主要存在于動(dòng)物蛋白質(zhì)中,如肉類、奶制品和蛋類,并廣泛的應(yīng)用于食品、藥物和化妝品等領(lǐng)域。
檢測(cè)甲硫氨酸含量的方法,主要有高效液相色譜(HPLC)法,薄層色譜法,串聯(lián)質(zhì)譜法,酶活法等。這里主要以高效液相色譜(HPLC)法為例,簡單介紹一下流程。
1.樣品處理
研磨樣品,精確稱量,放在100ml的量瓶中,加水70ml,超聲振蕩溶解,放冷。用水稀釋至刻度,搖勻,過濾,精密量取濾液5ml,放在25ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻。
2.色譜條件
采用C18的色譜柱,長度250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um;以0.05mol/L的磷酸二氫鉀-甲醇(85:15)為流動(dòng)相,流速為1ml/min;紫外檢測(cè)器,波長201nm,進(jìn)樣量10-20ul。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
稱取甲硫氨酸對(duì)照品,加水溶解并定量稀釋成0.1mg/ml。梯度,成倍的稀釋5-7個(gè)點(diǎn),分別注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖。橫坐標(biāo)是標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,縱坐標(biāo)是對(duì)應(yīng)的色譜峰面積,描點(diǎn)劃線,繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。r2>0.999,這個(gè)操作可以在辦公軟件中完成。
4.結(jié)果計(jì)算
測(cè)定樣品中的甲硫氨酸色譜峰,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中的甲硫氨酸含量。