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腺苷一磷酸,簡稱AMP,它是腺嘌呤核苷酸,是一種有機化合物。它的化學(xué)式為C10H14N5O7P,分子量為347.22,微溶于乙醇和沸水,不溶于乙醚。它是由一個腺嘌呤,一個核糖和一個磷酸基團組成。它可以用作食品生產(chǎn),藥物研發(fā),生化試劑。在細胞體內(nèi),AMP參與能量的存儲和釋放,當(dāng)細胞需要能量的時候,AMP就吸收能量,變成ADP和ATP;當(dāng)細胞用完了能量的時候,就會逐漸變成AMP了。除此之外,它還參與細胞的信號傳導(dǎo),調(diào)節(jié)細胞的代謝。
檢測方法有高效液相色譜(HPLC)法,分光光度法等。這里以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測流程。
1.樣品處理
細胞或組織樣本的樣本,采用破碎、勻漿、離心,過濾等方法,以釋放AMP。
2.色譜條件
C18色譜柱,常用的規(guī)格,長度250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um,柱溫25℃;流動相一般是由磷酸鹽和甲醇或乙腈組成,根據(jù)實際情況調(diào)整比例,梯度洗脫,流速一般為1ml/min。紫外檢測器,波長254nm,進樣量10uL,僅供參考。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
使用AMP的標(biāo)準(zhǔn)品,制備一系列的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將標(biāo)準(zhǔn)品溶液,成倍的,梯度的稀釋5-7個點,在檢測器的有效范圍內(nèi)。根據(jù)上述的色譜條件,上機測定色譜峰。對峰面積進行手動或自動積分,以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo),對應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo),描點連線,繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程?;貧w方程的相關(guān)系數(shù)r2>0.999,考慮回收率,重復(fù)性。
4.樣品測定和結(jié)果計算
將處理好的樣品,進樣到HPLC中,和標(biāo)準(zhǔn)品相同的色譜條件,記錄色譜峰。根據(jù)測出來的樣品的色譜峰面積,結(jié)合回歸方程,計算出樣品中的AMP含量。