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飛燕草素是一種花青素類化合物,主要來源于藍莓,黑莓,紫甘藍,紫薯等有重顏色的植物或水果。具有清楚自由基,抑制炎癥因子,降低低密度脂蛋白(LDL)氧化,抑制β-淀粉樣蛋白沉積等作用。通常情況下,它的化學結構是2-苯基苯并吡喃陽離子為核心,包含多個羥基。化學式為C15H11CIO7,易溶于水、甲醇、乙醇等極性溶劑。其在酸性條件下呈紅色,隨著pH值升高逐漸變?yōu)樽仙?、藍色,顯示出明顯的酸堿變色特性。具有多種糖苷結合形式,如飛燕草素-3-0-半乳糖苷,飛燕草素-3-0-葡萄糖苷,飛燕草素-3-0-蕓香糖苷,飛燕草素-3-0-5-0-二葡萄糖苷等。
檢測方法:常規(guī)的實驗室一般用高效液相色譜(HPLC),超高液相色譜(UPLC),液相色譜質譜聯(lián)用(LC-MS),薄層色譜等。以HPLC為例,簡單的介紹一下。
1.樣品處理
選擇新鮮的花瓣或葉片等,在陰涼的地方自然晾干或采用冷凍干燥技術進行處理。將干燥的樣本粉碎或研磨成粉后,采用有機溶劑,比如甲醇,乙酸乙酯等,超聲波提取,膜過濾待測。
2.色譜條件
植物色素一般用紫外檢測器,波長通常為520nm。采用C18的色譜柱,250mm長,4.6mm內徑,5um粒徑,柱溫30℃,根據(jù)實際情況調整。用甲醇和水,或0.1%甲酸水和乙腈,梯度洗脫。流速1mL/min,進樣量10-20uL。僅供參考。
3.標準曲線
將飛燕草素標準品用流動相溶解制成一定濃度的標準母液,依次成倍的稀釋6個濃度點,確保樣本的溶液可能在這個范圍內,并滿足檢測器的檢測限。根據(jù)HPLC色譜條件,測出對應的色譜峰,記錄峰的保留時間和峰面積。對色譜峰面積進行積分,并記錄在表格中,對應它的標準溶液濃度,擬合出標準曲線,得到回歸方程,相關系數(shù)R2要大于0.999并接近于1。另外,標準曲線要經(jīng)過原點,否則就會存在系統(tǒng)誤差。
4.含量計算
樣本溶液的測定步驟和標準品是相似的,通過標準品的色譜峰保留時間,可以識別出樣本的目標化合物峰。對樣本峰面積進行手工或自動積分,將峰面積代入到回歸方程,計算出飛燕草素含量。
檢測飛燕草色素、矢車菊色素、矮牽牛色素、天竺葵色素、芍藥素和錦葵色素等植物色素。