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黃芪皂苷是從中藥材黃芪中提取出來的一種活性成分,具有多種藥理作用,比如增強免疫力,抗疲勞,抗氧化,抗炎等。黃芪皂苷的主要是由糖苷和皂苷兩部分組成,其中糖苷包括葡萄糖,鼠李糖等,皂苷部分包括甾體或三萜類化合物。目前從黃芪中分離出來的皂苷有很多種,主要有黃芪皂苷I,II,III,IV等。黃芪皂苷在植物中的含量比較低,在實驗室檢測過程中一般會采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)等方法測定含量。
1.樣品處理
通過70%的甲醇進行回流提取,水飽和正丁醇萃取黃芪中的皂苷成分。
2.色譜條件
采用C18的色譜柱,250mmx4.6mm,5um,柱溫25-30℃;以乙腈和水,或0.3%甲酸和乙腈,梯度洗脫,流速為1.0ml/min,進樣量10-20uL。下面就是檢測器了,我看有不同種類的檢測器。有的用示差檢測器(RID),也有蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD),還有質(zhì)譜檢測器(MS)。
3.標準曲線
計算含量,用外標法的話就是標準曲線。采用黃芪皂苷的一種類型的標準品,用有機溶劑進行溶解和稀釋,通常是采用流動相中的有機溶劑。這樣的話,標準品進入到流動相中就不會發(fā)生突然的變化,從而導致色譜峰出現(xiàn)不規(guī)則。對每個參數(shù)的調(diào)整,都需要開發(fā)或驗證,從而確定最佳的色譜條件,獲得相對準確的有效的色譜峰。梯度稀釋,形成5-7個濃度點,進樣到HPLC中,測定出對應的色譜峰。當然,如果是質(zhì)譜,就是被打碎的具有質(zhì)荷比(m/z)的離子峰。對峰面積進行積分,在表格中對應到它的標準溶液濃度,可以繪制出標準曲線,得到回歸方程,相關系數(shù)需要大于0.999。
4.含量計算
標準品已經(jīng)走過一遍了,現(xiàn)在可以上機測樣品溶液。樣品出來的峰可能會比較多,并沒有標品那么純凈。但是,根據(jù)色譜柱的特點,在標準品色譜圖中找到它的保留時間,就能對應的分析出來樣品色譜圖中的位置,識別出目標峰。對峰面積進行手動或自動積分,代入到回歸方程,計算出對應黃芪皂苷的含量。