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煙堿，有稱為尼古丁，化學(xué)式C10H14N2，分子量為162.2，有毒。易溶于水，也溶于乙醇、乙醚、丙酮等有機溶劑。它主要存在于茄科植物中，煙草中含有的生物堿之一。科學(xué)研究證明，它會通過血液循環(huán)傳輸?shù)酱竽X，刺激中樞神經(jīng)產(chǎn)生心理和生理效應(yīng)。

檢測樣品中煙堿含量的方法有多種，比如氣相色譜（GC）法、高效液相色譜（HPLC）法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）法、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、紫外分光光度法等。

以高效液相色譜（HPLC）法為例，簡單的介紹一下檢測過程。

樣品前處理：將樣品磨碎成粉末，用有機溶劑如75%的甲醇溶解，并用超聲提取30min。具體的操作步驟，需要參考相關(guān)的文獻(xiàn)資料或操作規(guī)程。

色譜條件：hplc的色譜條件，是根據(jù)樣品的物理和化學(xué)性質(zhì)來確定的。使用常規(guī)的C18色譜柱，如150mm長，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5um，柱溫30-40℃；用0.1mol/L的磷酸二氫鉀和磷酸緩沖溶液（pH2.5）或者甲醇-磷酸或甲醇-水（0.1%磷酸），等度或梯度洗脫，流速1ml/min；紫外檢測器，波長260nm，進(jìn)樣量5-10ul。僅供參考，實際操作過程中，需要對方法進(jìn)行驗證，或重新開發(fā)出來。不同的設(shè)備和環(huán)境條件，測試的色譜條件是會有差異的。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解，逐步的，梯度稀釋5-7個濃度點。有人說，怎么確定最低點的濃度呢？這個要看檢測器的有效的檢測范圍，也就是檢測限或定量限，通過信噪比的倍數(shù)，確定出您需要的最低的濃度點。通過成熟的或驗證成功的色譜條件，測出各個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰。對色譜峰面積進(jìn)行積分，對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，描點繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線來。為什么說是標(biāo)準(zhǔn)曲線，其實它是一條線，用它來計算樣品的濃度的。因為一條線上有無數(shù)個點，不知道樣品的色譜峰面積是在哪個點，就用一條直線來測量?？礃?biāo)曲做的好不好，其實也是有要求的，比如相關(guān)系數(shù)r2＞0.999，重復(fù)性RSD符合要求等。

樣品測定：樣品測試過程和標(biāo)準(zhǔn)品是相似的，根據(jù)測出來的色譜峰，對面積進(jìn)行手動或自動積分。結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品中的煙堿含量。