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鞣花酸的檢測(cè)方法
來(lái)源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2025-02-14 | 157 次瀏覽 | 分享到:
鞣花酸主要來(lái)源于水果、蔬菜等植物,比如,藍(lán)莓,葡萄,梨,核桃,杏仁,菠菜,芹菜,西蘭花等。通過(guò)科學(xué)研究證明,鞣花酸具有抗氧化能力和自由基清除能力。鞣花酸的化學(xué)式為C14H6O8,分子量302.28,具有兩個(gè)內(nèi)酯環(huán)和四個(gè)羥基官能團(tuán),是沒(méi)食子酸的二聚衍生物,是芳香族有機(jī)酸,也屬于天然多酚類物質(zhì)。微溶于水、醇,溶于堿、吡啶和二甲基亞砜,不溶于醚。鞣花酸與三氯化鐵的顯色反應(yīng)呈藍(lán)色,遇硫酸呈黃色。

鞣花酸主要來(lái)源于水果、蔬菜等植物,比如,藍(lán)莓,葡萄,梨,核桃,杏仁,菠菜,芹菜,西蘭花等。通過(guò)科學(xué)研究證明,鞣花酸具有抗氧化能力和自由基清除能力。鞣花酸的化學(xué)式為C14H6O8,分子量302.28,具有兩個(gè)內(nèi)酯環(huán)和四個(gè)羥基官能團(tuán),是沒(méi)食子酸的二聚衍生物,是芳香族有機(jī)酸,也屬于天然多酚類物質(zhì)。微溶于水、醇,溶于堿、吡啶和二甲基亞砜,不溶于醚。鞣花酸與三氯化鐵的顯色反應(yīng)呈藍(lán)色,遇硫酸呈黃色。



檢測(cè)方法:紫外-可見(jiàn)分光光度法,高效液相色譜法,液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等。


1.紫外-可見(jiàn)分光光度法


將樣品中的鞣花酸,通過(guò)有機(jī)溶劑提取出來(lái),如果是植物樣本,就要先進(jìn)行粉碎,盡可能溶入到有機(jī)溶劑中。通過(guò)一系列的超聲,過(guò)濾流程,獲得待測(cè)的鞣花酸溶液。我們不能說(shuō),通過(guò)現(xiàn)在的手段提取出來(lái)的,一定是全部的鞣花酸。而是建立在提取方法的基礎(chǔ)上,得到的鞣花酸含量。因此,隨著科技的發(fā)展,也許將來(lái)會(huì)有更好的方法,得到更準(zhǔn)確的,可利用的結(jié)果。



使用分光光度法,將溶液進(jìn)行顯色反應(yīng),在特定的波長(zhǎng)下,測(cè)溶液的吸光度值。我們測(cè)的是樣品的吸光度值,但怎么知道它的濃度呢?就要利用標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái),因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)品的濃度是已知的,是可以計(jì)算出來(lái)的。通過(guò)已知濃度的溶液,和樣品相同的條件下,去發(fā)生顯色反應(yīng),測(cè)定出對(duì)應(yīng)的吸光度值。通過(guò)7-8個(gè)點(diǎn),在坐標(biāo)軸上描點(diǎn),最終連接在一起,形成一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。于是,我們就可以根據(jù)測(cè)出來(lái)樣品的吸光度值,計(jì)算出樣品中的鞣花酸含量。這個(gè)時(shí)候,我們要考慮的是樣品和標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定的時(shí)候,要做空白對(duì)照,減少誤差。


2.高效液相色譜法


流動(dòng)相是甲醇,乙腈等有機(jī)溶劑,是液體的。流動(dòng)相的作用,是將樣品中的化合物帶入色譜柱,并逐步的洗脫出來(lái)。為什么能洗脫出來(lái),就是因?yàn)椴煌再|(zhì)的化合物,和色譜柱固定相的吸附強(qiáng)弱不同。于是,隨著流動(dòng)相的的不斷,持續(xù)的進(jìn)行。固定相的化合物就會(huì)逐步的洗出來(lái),濃度由低到高,再由高到低,形成了一個(gè)峰的形態(tài)。如果色譜柱或流動(dòng)相出現(xiàn)了問(wèn)題,這個(gè)峰就不那么規(guī)則了。流動(dòng)的是均勻的,出峰的時(shí)間相對(duì)是特殊的。



采用常規(guī)的C18色譜柱,流動(dòng)相是水和有機(jī)溶劑的混合物(如甲醇-水),流速通常為1ml/min,進(jìn)樣量10-20ul,紫外檢測(cè)器,280nm,根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。


為了能夠準(zhǔn)確的計(jì)算出樣品的鞣花酸含量,還是要用標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法。將標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行溶解,配制成工作溶液,并進(jìn)行成倍的、梯度的稀釋5-7個(gè)點(diǎn)。這個(gè)濃度是已知的,可以通過(guò)測(cè)出來(lái)的色譜峰,對(duì)峰面積進(jìn)行手動(dòng)或自動(dòng)積分,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。方法學(xué)驗(yàn)證。


樣品也是要測(cè)的,道理是一樣的,根據(jù)測(cè)出來(lái)的色譜峰面積,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,是能夠計(jì)算出樣品中的鞣花酸含量的。



3.液相色譜-質(zhì)譜


它是在液相分離出來(lái)化合物的基礎(chǔ)上,進(jìn)入質(zhì)譜。將化合物打碎,通過(guò)質(zhì)荷比(m/z),排列形成質(zhì)譜峰。也是需要經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品的鞣花酸含量。這個(gè)方法相對(duì)準(zhǔn)確,需要更專業(yè)的技術(shù)操作。


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