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油菜素甾醇是一種高生理活性的甾體激素，在植物中的含量比較低，最早來源于油菜的花粉中。油菜素甾醇在植物生長過程中起著重要的作用，比如促進(jìn)細(xì)胞膜洗脫質(zhì)子泵對氫離子的泵出，調(diào)節(jié)細(xì)胞壁松弛，加快生長速度，抑制生長素氧化酶的活性等。近幾十年來，它被確定為新的植物激素。目前我們常見的植物激素有生長素，細(xì)胞分裂素，赤霉素，脫落酸，乙烯，茉莉酸，水楊酸，獨(dú)腳金內(nèi)酯等。油菜素甾醇在植物體內(nèi)合成途徑比較多，比如C-6氧化，C22氧化?；瘜W(xué)式為C28H50O，分子量為402.69，溶于有機(jī)溶劑如乙醇，氯仿和乙酸乙酯，但不溶于水和酸堿。

檢測植物中的油菜素甾醇的含量，一般采用高效液相色譜（HPLC），氣相色譜（GC），液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS），氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）等方法。以HPLC為例，簡單的介紹一下測定流程。

1.樣品處理

如果是植物樣品，常常將樣品進(jìn)行粉碎研磨處理，并加入乙酸乙酯溶劑，超聲處理，過濾待測。乙酸乙酯的純度和體積都是有要求的，一般可以參考相關(guān)的文獻(xiàn)資料，記住超聲波的功率，頻率和時(shí)間，在多少溫度下進(jìn)行。冷卻后用乙酸乙酯補(bǔ)充失去的重量，進(jìn)行0.22um的微孔膜過濾。

2.色譜條件

C18的色譜柱，250mm長，4.6mm的內(nèi)徑，5um的粒徑，柱溫30℃；以乙腈和水為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速1ml/min，紫外檢測器，波長208nm，進(jìn)樣量10-20ul，僅供參考。

3.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用油菜素甾醇的標(biāo)準(zhǔn)品，先配制出母液出來，然后進(jìn)行成倍的稀釋5-7個(gè)點(diǎn)，確保在檢測限的有效范圍內(nèi)，并覆蓋到樣本濃度的可能范圍。依次進(jìn)樣到HPLC中，記錄標(biāo)準(zhǔn)溶液的出峰保留時(shí)間和峰高或峰面積。對峰面積進(jìn)行積分處理，和峰面積對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對應(yīng)擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，相關(guān)系數(shù)R2大于0.999，接近于1。

4.含量計(jì)算

將樣品溶液進(jìn)樣到HPLC中，看出峰的情況。如果出峰正常，通過保留時(shí)間可以識(shí)別出目標(biāo)峰的位置，并對它進(jìn)行積分處理。代入到回歸方程，計(jì)算出樣品溶液中的油菜素甾醇含量。