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當(dāng)肌肉活動(dòng)的時(shí)候，就會(huì)消耗肝糖元；當(dāng)肝糖消耗完的時(shí)候，就要消耗組織組織了。中性的脂肪組織會(huì)被分解為游離脂肪酸，被當(dāng)做能源來(lái)使用。游離脂肪酸存在于人的脂質(zhì)內(nèi)，大致可分為膽固醇，中性脂肪，磷脂質(zhì)等3種。血清中的游離脂肪酸和脂類代謝，糖代謝，內(nèi)分泌等功能有關(guān)。

檢測(cè)樣本中的游離脂肪酸含量，實(shí)驗(yàn)室一般采用氣相色譜（GC）或滴定法完成。由于滴定法測(cè)定的結(jié)果沒(méi)有那么精準(zhǔn)，這里著重用氣相色譜法來(lái)講述一下檢測(cè)過(guò)程。

1.樣品前處理

在樣品中加入二氯甲烷-甲醇溶液（V/V=2:1）勻漿，4000r/min離心5min，分別取下層溶液和上層溶液于具塞試管中，加入20%的0.88% KCl 溶液后混勻，過(guò)夜分層后取下層液體真空干燥，所得物質(zhì)即為粗脂肪。加入酮－甲醇溶液（V/V=2:1）和陰離子交換樹(shù)脂于恒溫振蕩器中震蕩2h 后去除溶液，用丙酮－甲醇溶液洗5 次( 共用20mL) ，最后在通風(fēng)櫥中用氮?dú)鈱⒔粨Q樹(shù)脂吹干。

甲酯化：加5mL 0.5mol /L 的氫氧化鈉甲醇溶液混勻后連接回流裝置。在100℃水浴中加熱回流5min，然后加3mL 三氟化硼－ 10% 甲醇溶液反應(yīng)5min，最后加入2mL 正己烷回流萃取2min，取出冷凝裝置將回流瓶冷卻至室溫后加NaCl 飽和溶液混合，并將其移入具塞試管中，反復(fù)沖洗回流瓶3 次將洗液一并倒入具塞試管中靜置。待分層后吸取上層溶液( 正己烷層) 約lmL 于樣品瓶中，于4℃下保存。

2.色譜條件

采用SP－2560的色譜柱，柱初始溫度60℃，以8℃ /min 升溫至180℃，1.5℃ /min 升溫至240℃，保持3min; 氣化室溫度250℃，載氣: N2; 柱流速:1mL /min; 分流比: 30∶1; 進(jìn)樣量1μL。采用氫火焰離子檢測(cè)器（FID）。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

一般情況下，為了能夠更準(zhǔn)確的計(jì)算出樣品中的游離脂肪酸含量。采用外標(biāo)法，也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線，即回歸方程來(lái)計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)曲線，一般是采用5-7個(gè)點(diǎn)，通常是6個(gè)梯度濃度。對(duì)脂肪酸甲酯的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解和稀釋，并在有效的檢測(cè)范圍內(nèi)。橫坐標(biāo)是每個(gè)稀釋的濃度點(diǎn)，縱坐標(biāo)是對(duì)應(yīng)色譜峰面積的積分，通過(guò)表格函數(shù)的形式就可以獲得。

4.含量計(jì)算

有了標(biāo)準(zhǔn)曲線，只要測(cè)出來(lái)樣品中的脂肪酸甲酯的峰面積，就可以通過(guò)回歸方程，計(jì)算出含量了。這個(gè)時(shí)候，通過(guò)出峰時(shí)間，可以判斷出樣品中的對(duì)應(yīng)的峰。對(duì)面積進(jìn)行手動(dòng)或自動(dòng)積分，并計(jì)算出樣品中的脂肪酸甲酯含量。