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植物在生長代謝的過程中會需要氨基酸，氨基酸的種類有很多，從目前的科學(xué)研究來看，植物必需的氨基酸有8種：苯丙氨酸，異亮氨酸，賴氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，纈氨酸，色氨酸，蘇氨酸。當(dāng)然，還有其他種類的氨基酸。其他的氨基酸在代謝的過程中也起著很重要的作用，比如丙氨酸能夠增強(qiáng)葉綠體的合成，調(diào)節(jié)氣孔關(guān)閉，保持水分的平衡。谷氨酸能刺激植物不斷生長，增強(qiáng)惡劣環(huán)境的適應(yīng)能力。甘氨酸能提高光合作用效率，增加糖分的含量，提升農(nóng)作物果實的品質(zhì)等。在植物代謝的過程中，氨基酸并不是獨立的，而是相互關(guān)聯(lián)并不斷作用而產(chǎn)生的。

檢測植物中的氨基酸種類和含量，對了解植物的代謝過程，種類的作用，含量的變化，都是非常有必要的。一般情況下，檢測氨基酸含量，是通過高效液相色譜（HPLC）法。當(dāng)然，這并不是唯一的方法，現(xiàn)在有現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)和操作步驟參考。在實際操作的過程中，需要對方法，特別是色譜條件進(jìn)行驗證，從而獲得有效的色譜峰，有利于得到準(zhǔn)確的計算結(jié)果。

以HPLC為例，檢測過程包括了前處理，色譜條件，色譜峰和原始數(shù)據(jù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算結(jié)果等。

1.前處理

前處理也稱為樣品提取，提取出目標(biāo)氨基酸。它包括了水解和衍生步驟。將0.2g的樣品，放入15ml的離心管中，加入2ml的6mol/L的HCL，充分振蕩5min。放入105℃的烘箱，水解24h。冷卻到室溫，用HCL補(bǔ)充揮發(fā)的部分。用6mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)到中性，用水定容到5ml，振蕩5min。4000r/min的離心，10min內(nèi)可以獲得相對清澈的上清液。

衍生的過程，就是將0.5ml的上述的提取液，加入pH=9.0的碳酸氫鈉緩沖液和DNFB各0.5ml，加入60℃的水浴中，避光反應(yīng)60min。取出，冷卻到室溫，加入3.5ml的pH=7.0的磷酸緩沖溶液，充分混勻，避光反應(yīng)15min，取上清液0.22um膜過濾。

2.色譜條件

檢測器：DAD  C18色譜柱：250*4.6mm; 5μm    

柱溫：38℃      流速：1ml/min   進(jìn)樣量：20μL   波長：360nm  

流動相：A:乙腈:甲醇=90:10   B:0.02mol/L磷酸二氫鈉+磷酸氫二鈉

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

將目標(biāo)氨基酸進(jìn)行稀釋，成倍的，梯度稀釋5-7個濃度點。以上述的色譜條件，測定對應(yīng)的色譜峰。對色譜峰面積進(jìn)行積分，結(jié)合對應(yīng)點的標(biāo)準(zhǔn)品濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得的回歸方程。一般情況下，相關(guān)系數(shù)r2＞0.999，重復(fù)性符合規(guī)定要求。

4.計算結(jié)果

對樣品進(jìn)行測定，根據(jù)樣品的色譜峰面積，結(jié)合回歸方程，可以計算出樣品的氨基酸含量。

氨基酸：天冬氨酸，蘇氨酸，谷氨酸，脯氨酸，甘氨酸，纈氨酸，γ-氨基丁酸（GABA），苯丙氨酸，組氨酸，精氨酸，丙氨酸，酪氨酸，甲硫氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，半胱氨酸，刀豆氨酸，天冬氨酰，高絲氨酸，犬尿氨酸，色氨酸，瓜氨酸，羥脯氨酸，半胱氨酸，鳥氨酸，?；撬?，氨基環(huán)丙烷羧酸，聚谷氨酸，谷氨酸鈉，對氨基苯甲酸等。