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維生素B6(VB6)還可以稱(chēng)為吡哆素,它不是一個(gè)物質(zhì),包括了吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺,主要以磷酸脂的形式存在。VB6是一種水溶性的維生素,遇到光、堿、高溫容易被破壞。它溶入水和乙醇,在酸中是穩(wěn)定的。VB6在酵母菌、動(dòng)物肝臟、魚(yú)肉、蛋、豆、花生等中含量豐富。當(dāng)然,它也是人體內(nèi)不可缺少的維生素。參與多種代謝反應(yīng),特別是和氨基酸代謝有關(guān)。
實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)VB6的方法有多種,常規(guī)的有高效液相色譜(HPLC)法、氣相-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法。這里,用稍微簡(jiǎn)單的HPLC方法。當(dāng)然,需要做定性和定量分析,也可以使用質(zhì)譜檢測(cè)器。
HPLC檢測(cè)條件:C18色譜柱,紫外檢測(cè)器291nm波長(zhǎng),流動(dòng)相為0.04%戊烷磺酸鈉溶液:甲醇=85:15,柱溫:室溫,進(jìn)樣量10uL。
樣品制備:上面已經(jīng)說(shuō)過(guò),VB6的化學(xué)性質(zhì)比較特殊,在制備的過(guò)程中避免高溫、堿、光等破壞因素,根據(jù)操作說(shuō)明,按部就班完成提取,用流動(dòng)相溶解定量稀釋成0.1mg/ml的溶液,搖勻,靜置,備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作:選擇VB6標(biāo)準(zhǔn)品,制備成梯度稀釋的、不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在以上的檢測(cè)條件下,進(jìn)行HPLC檢測(cè),分別記錄進(jìn)樣檢測(cè)出來(lái)的色譜峰高和峰面積數(shù)據(jù)。以標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰高或峰面積為縱坐標(biāo),以對(duì)應(yīng)濃度為橫坐標(biāo),在專(zhuān)業(yè)的軟件或工具的作用下繪制成一條曲線(xiàn),并計(jì)算出方程和相關(guān)系數(shù)。
檢測(cè)樣品和計(jì)算結(jié)果:在和標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)相同的條件下,進(jìn)樣檢測(cè)樣品,在hplc上讀取數(shù)據(jù)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方法,將樣品的峰面積或峰高代入,求出對(duì)應(yīng)的VB6的含量,考慮到實(shí)驗(yàn)的誤差,一般都是要給出一個(gè)校正因子,對(duì)濃度進(jìn)行一定的修正。