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硝酸還原酶是一種催化硝酸離子還原為亞硝酸離子的酶，它位于細胞質(zhì)內(nèi)或細胞膜外，在硝酸鹽還原的途徑中具有限速的作用，靠NADH或NADPH提供電子催化反應(yīng)。當有硝酸鹽存在土壤的時候，會通過硝酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白運輸?shù)街参锔毎?，在這里植物體內(nèi)的硝酸鹽被還原成亞硝酸鹽。亞硝酸鹽會進入到根部的葉綠體中，在6-鐵氧還蛋白的幫助下，亞硝酸會被進一步還原成銨NH+4。隨后，ATP給它提供能量補給，谷氨酰胺合成酶將谷氨酸和NH+4轉(zhuǎn)換為谷氨酰胺，最終參與到氨基酸的合成。當植物細胞中的NH+4濃度較高的時候，NADH提供電子，NH+4還可以由存在葉綠體和線粒體中的谷氨酸脫氫酶還原為谷氨酸。

植物體內(nèi)的硝酸鹽在硝酸還原酶和亞硝酸還原酶的作用下，通過代謝途徑轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽，再轉(zhuǎn)化為銨，最后被用于蛋白質(zhì)的合成。土壤中硝酸鹽含量過高時，植物體內(nèi)的硝酸還原酶和亞硝酸還原酶不發(fā)揮作用，從而導致硝酸鹽和亞硝酸鹽的積累。亞硝酸鹽是在葉片褐變和莖形成過程中產(chǎn)生的。檢測硝酸還原酶，常用的方法是比色法，當然也有更多、更高靈敏度的檢測方案。

檢測原理：NO3-+NADH+H=NO2-+NAD+H2O，在反應(yīng)的過程中，產(chǎn)生的NO2-從植物組織內(nèi)滲透到外界溶液中積累，測定反應(yīng)溶液中的NO2-含量的增加，就可以測定酶活。NO2-含量的測定，是用氨基苯磺酸比色法。亞硝酸在酸性的條件下，可以和氨基苯磺酸及α-萘胺生成紅色的化合物。這種紅色的化合物，顏色在2-3小時內(nèi)是比較穩(wěn)定的，可以通過分光光度計測定其含量。

在檢測的過程中，標準曲線的制作顯得比較重要。吸取不同濃度的NaNO2溶液，這個就是標準品濃度是已知的，經(jīng)過梯度稀釋后，加入對氨基苯磺酸試劑和α-萘胺試劑，混合均勻，靜置20分鐘，在分光光度計的520nm的波長處進行分別測定，有必要的話，可以做重復(fù)。讀取對應(yīng)濃度NaNO2的吸光度值，以吸光度值為縱坐標，以濃度為橫坐標，制作標準曲線。

最后，對植物樣品進行適當?shù)奶幚?，并按對標準品檢測同樣的方法檢測，吸光度值是可以讀取出來的?？梢远鄿y幾次，求取平均值。根據(jù)標準曲線，可以計算出樣品中亞硝酸鹽的含量。計算酶活的話，以每小時每克新鮮的植物產(chǎn)生NO2-的克數(shù)來表示。