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植物脫落酸含量檢測(cè)方法
來(lái)源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-06-19 | 366 次瀏覽 | 分享到:

植物脫落酸是一種具有倍半萜結(jié)構(gòu)的激素,化學(xué)式為C15H20O4,是一種能夠抑制植物生長(zhǎng)的激素。那么,為什么會(huì)有抑制植物生長(zhǎng)的激素存在植物中呢?道理其實(shí)很簡(jiǎn)單,植物生長(zhǎng)是依靠環(huán)境的,當(dāng)環(huán)境對(duì)植物生長(zhǎng)有利的時(shí)候,生長(zhǎng)激素會(huì)增加從而提高生長(zhǎng)。當(dāng)環(huán)境條件對(duì)生長(zhǎng)不利的時(shí)候,就會(huì)有抑制激素釋放出來(lái),也算是一種自我保護(hù)機(jī)制吧。它廣泛的存在高等植物中,能夠讓葉子脫落而得名。葉子脫落,減少植物的呼吸作用,降低能量的消耗,從而處于休眠狀態(tài),以等待新的成長(zhǎng)環(huán)境的到來(lái)。



大家知道嗎,植物有五大激素,即生長(zhǎng)素、乙烯、赤霉素、細(xì)胞分裂素、脫落酸。脫落酸就是五大激素之一,它可以提高植物的抗旱、抗鹽能力,在干旱、寒冷、高溫、鹽漬和水澇等逆境都能使植物體內(nèi)脫落酸迅速增加,同時(shí)植物的抗逆性增強(qiáng)。能夠應(yīng)對(duì)惡劣的環(huán)境條件,對(duì)植物造林或沙漠綠化都有積極的價(jià)值。因?yàn)樗幸种粕L(zhǎng)的作用,比如植物的種子,可以用來(lái)儲(chǔ)藏和保存。也能夠讓植物葉片的氣孔關(guān)閉,比如鮮花的保鮮,花期的調(diào)整等方面,具有很好的應(yīng)用價(jià)值。脫落酸是弱酸,在生長(zhǎng)旺盛的植物中,你是很難發(fā)現(xiàn)或檢測(cè)到脫落酸的,它主要存在萎蔫的葉片、種子、花或果實(shí)器官中。



檢測(cè)植物中脫落酸含量的方法有高效液相色譜(HPLC)法、酶聯(lián)免疫(ELISA)法。


其中,HPLC檢測(cè)脫落酸的步驟包括:樣品制備-提取脫落酸-進(jìn)樣準(zhǔn)備-色譜測(cè)定-標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)-結(jié)果分析。其中,檢測(cè)條件的設(shè)置是比較關(guān)鍵的。比如選擇合適的色譜柱,配置必要的流動(dòng)相,將進(jìn)樣量和進(jìn)樣速率控制在合理的范圍內(nèi),從而顯示出最佳的峰高或峰面積。因?yàn)?,在檢測(cè)結(jié)果分析的時(shí)候,就是要對(duì)這些峰高和峰面積進(jìn)行量化的。如果檢測(cè)結(jié)果不清晰,數(shù)據(jù)就不一定夠精準(zhǔn)。當(dāng)然,為了計(jì)算結(jié)果的準(zhǔn)確,樣品的準(zhǔn)備和提取過(guò)程更是需要認(rèn)真對(duì)待,按流程和要求處理。



而ELISA檢測(cè)法則更簡(jiǎn)單一些,不需要那么高的技術(shù)和昂貴的設(shè)備,就需要試劑盒和酶標(biāo)儀完成??雌饋?lái)比較簡(jiǎn)單,其實(shí)也是考驗(yàn)基本功的。如果操作不恰當(dāng),比如對(duì)樣品性質(zhì)不了解,技術(shù)方法不熟悉,操作順序有忽略,都可能會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的偏差?,F(xiàn)在的試劑盒,是在微孔板上進(jìn)行的,需要通過(guò)酶標(biāo)儀來(lái)讀數(shù)的。



檢測(cè)原理是:將目標(biāo)抗體包被在96孔的微孔板上,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品。其中的目標(biāo)連接在固相載體上的抗體結(jié)合,加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體,洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化作用下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化為黃色。這個(gè)顏色的深淺在一定程度上反應(yīng)了目標(biāo)檢測(cè)物的濃度,在酶標(biāo)儀450nm的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品中的脫落酸含量。


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